感受态DH细菌细胞转化方法有哪些吗?
点击次数:1274 更新时间:2018-08-28
DH的感受态是指细胞经过一些特殊方法(电击法、CaCl2法等处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞,即感受态细胞(Compenent cells).那么,感受态DH细菌细胞转化方法有哪些吗?下面就有小编来为您详细介绍一下吧!
1.制冰盒一个,打开净化工作台电源,使其处于工作状态,以下操作除孵育、振荡菌液外,其余均需在净化工作台内进行。
2.从-80℃冰箱中取出“感受态DH细菌细胞”一支,“试剂A”,从-20℃冰箱中取出无菌双蒸水一支和待转化的质粒DNA一支,均置冰盒内。
3.取消毒1.5 ml Eppendorf管一支,用移液器将待转化质粒DNA 1ul、“试剂A”20 ul、无菌双蒸水80 ul,分别吸入消毒1.5 ml Eppendorf管内混匀,冰上备用。将感受态DH细菌细胞80-100 ul吸入消毒1.5 ml Eppendorf管内混匀,冰浴20分钟。随后,室温放置10分钟。
4.在1.5 ml Eppendorf管内加入400ul LB液体培养基,37℃,200rpm振荡10-40分钟。
5.随后取100-600 ul铺平板,于37℃温箱培养12-16小时。

